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?組織固定?
取材后立即浸泡于4%多聚甲醛(4℃),固定時間≥48小時
特殊組織(如骨/軟骨)需EDTA脫鈣4周
?脫水與透明?
梯度乙醇脫水:75%→85%→90%→95%→無水乙醇(每步30分鐘~4小時)
二甲苯透明:2次×10分鐘
?石蠟包埋?
浸蠟:3次×1小時(60℃石蠟)
包埋后4℃定型≥10小時
?切片制備?
厚度5 μm,45℃恒溫水浴攤片
37℃烤箱烤干(防脫片)
?脫蠟與水化?
二甲苯脫蠟:3次×5分鐘
梯度乙醇水化:無水乙醇→90%→80%→70%→純水(每步5分鐘)
?核質染色?
蘇木精染色:5~10分鐘
分化:1%鹽酸酒精5~10秒,流水返藍10分鐘
?胞質染色?
伊紅染色:10秒~2分鐘(根據組織類型調整)
?脫水與封片?
快速梯度乙醇脫水(80%→95%→無水乙醇)
二甲苯透明,中性樹膠封片
?顯微鏡設置?:
常用放大倍數:200×(海馬組織)、400×(脊髓/肺組織)
標尺標注:如20 μm(脊髓切片)
?典型結構?:
細胞核(藍色)、胞質/膠原(粉紅色)
?質量控制?
避免切片褶皺或脫片(烤片時間需充足)
分化時間精確控制,防止過染
?特殊組織處理?
神經組織需縮短伊紅染色時間(防止過深)
肌腱/軟骨注意脫鈣完整性
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