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品牌 | 其他品牌 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
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通過機械劃痕在單層腫瘤細胞上制造無細胞區域,觀察邊緣細胞向空白區遷移的能力,模擬體內腫瘤轉移過程
。
?細胞鋪板?
使用6孔板,接種密度為5×10?個細胞/孔(具體依細胞類型調整),過夜培養至90%融合度
。
鋪板后輕拍培養板兩側(非四邊)使細胞分布均勻
。
?劃痕制作?
用滅菌200μL槍頭或牙簽垂直接觸板底,勻速劃出直線(可借助直尺對齊)
。
每孔劃1-3道,劃痕寬度建議500μm(Culture Insert法可標準化寬度)
。
?清洗與培養?
PBS輕柔沖洗3次去除脫落細胞,換用含1-2% FBS的培養基抑制增殖干擾
。
加入絲烈霉素(4μg/mL)可進一步阻斷增殖,純化遷移效應
。
?圖像采集與分析?
?時間點?:0h、12h、24h(依細胞遷移速度調整)
。
?定位標記?:提前用Marker筆在板底畫網格線確保同一視野
。
?量化方法?:
遷移率 = (初始寬度 - 終點寬度) / 初始寬度 ×100%。
?細胞狀態?
選擇高活力(>95%)且低自發凋亡的腫瘤細胞系
。
避免過度消化,吹打時使用含血清培養基終止反應
。
?劃痕一致性?
槍頭需垂直板底,壓力均勻,多孔實驗建議同一人操作
。
預實驗確定最佳劃痕寬度(過窄易愈合,過寬難遷移)
。
?干擾控制?
排除增殖影響:低血清培養基或絲裂烈素處理
。
溫度穩定:操作全程在37℃恒溫臺進行,減少熱應激
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