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腫瘤細胞劃痕實驗

簡要描述:腫瘤細胞劃痕實驗是伊萊博生物的提供的一項基礎服務項目之一,由細胞平臺經驗豐富的實驗人員操作完成。

  • 更新時間:2025-05-26
  • 廠商性質:代理商
  • 訪  問  量:1658

詳細介紹

品牌其他品牌應用領域醫療衛生,生物產業

一、實驗原理

通過機械劃痕在單層腫瘤細胞上制造無細胞區域,觀察邊緣細胞向空白區遷移的能力,模擬體內腫瘤轉移過程

二、關鍵步驟

  1. ?細胞鋪板?

    • 使用6孔板,接種密度為5×10?個細胞/孔(具體依細胞類型調整),過夜培養至90%融合度

    • 鋪板后輕拍培養板兩側(非四邊)使細胞分布均勻

  2. ?劃痕制作?

    • 用滅菌200μL槍頭或牙簽垂直接觸板底,勻速劃出直線(可借助直尺對齊)

    • 每孔劃1-3道,劃痕寬度建議500μm(Culture Insert法可標準化寬度)

  3. ?清洗與培養?

    • PBS輕柔沖洗3次去除脫落細胞,換用含1-2% FBS的培養基抑制增殖干擾

    • 加入絲烈霉素(4μg/mL)可進一步阻斷增殖,純化遷移效應

  4. ?圖像采集與分析?

    • ?時間點?:0h、12h、24h(依細胞遷移速度調整)

    • ?定位標記?:提前用Marker筆在板底畫網格線確保同一視野

    • ?量化方法?:

    • 遷移率 = (初始寬度 - 終點寬度) / 初始寬度 ×100%

三、注意事項

  1. ?細胞狀態?

    • 選擇高活力(>95%)且低自發凋亡的腫瘤細胞系

    • 避免過度消化,吹打時使用含血清培養基終止反應

  2. ?劃痕一致性?

    • 槍頭需垂直板底,壓力均勻,多孔實驗建議同一人操作

    • 預實驗確定最佳劃痕寬度(過窄易愈合,過寬難遷移)

  3. ?干擾控制?

    • 排除增殖影響:低血清培養基或絲裂烈素處理

    • 溫度穩定:操作全程在37℃恒溫臺進行,減少熱應激





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